BMK-R001 脂肪幹細胞分離キット
BMK-R004 脂肪幹細胞分離キット（アルブミンフリー）
BMK-S100 脂肪幹細胞分離増殖キット（アルブミンフリー）
ヒトの脂肪、臍帯組織から脂肪幹細胞を簡単に分離できるキット
1キットにつき5回分の分離操作が可能
特長
・操作が短時間で簡単に行える
組織を細かくして幹細胞分離基材に載せて培養するだけ
・少量の組織があれば分離可能
米粒大程度のヒト脂肪、臍帯組織（約20mg）、ヒト脂肪吸引破砕物（約0.5ｍL）から幹細胞を分離可能
・高純度の幹細胞
分離基材から回収した細胞を脂肪細胞分化誘導培地で培養した際、80％以上の細胞が脂肪細胞に分化したことを確認
・細胞へのダメージが少ない
コラゲナーゼを使用しないため、細胞へのダメージを最小限に抑えられる
・間葉系幹細胞の分離、増殖に特化した培地
血清添加済の培地、またはご自身で選択した血清を添加して使用する培地（＝アルブミンフリー）を選択
・分化能と細胞表面マーカーの保持を確認
幹細胞分離基材について
・少量のヒトの脂肪臍帯組織から脂肪幹細胞を分離することができる不織布のこと
・PE-PPの芯鞘構造をもつ不織布にハイドロキシアパタイトを塗布しており、この基材の上にヒト脂肪組織を載せて培養することで、細胞外マトリックスを豊富に産生するヒト脂肪幹細胞（ASC）が分離できます。
使用方法（簡易ver.）
※作業は安全キャビネット等の無菌環境下で行ってください。
※ピンセット、ディッシュ、培養器具等が必要となります。
＜初代培養＞
- 基材を親水化処理して、6ウェルプレートに入れる。
- 脂肪組織または脂肪吸引物を生理食塩水（またはPBS）で洗浄後、基材の上に載せる。
脂肪吸引物の場合は、付属のセルストレーナーの上に基材を載せてから脂肪吸引物を載せる。 - 培地を1ウェルにつき5mL添加し、分離基材が培地に浸るようにする。
- 37℃インキュベーターで10～14日間培養する。
- 脂肪幹細胞が分離基材の10～20％程度占めるようになったら、細胞を回収する。
＜細胞回収、継代＞
- 細胞がOutgrowthした基材を50ｍLコニカルチューブに移し、約10ｍLの生理食塩水またはPBS(-)で2回洗浄する。
同じ検体（脂肪組織）を載せている基材が複数ある場合は基材２枚につき１本の50ｍLコニカルチューブにまとめても可。 - 基材の入ったコニカルチューブに基材１枚あたり約1ｍLの細胞剥離液（トリプシンEDTAなど）を加え、基材が浸るようにする。
- 室温で5～10分程度インキュベートすると細胞が剥がれるので、約20～30ｍLの生理食塩水またはPBS(-)を入れ、十分に転倒混和させる。
※剥がれない細胞もあるため、１０分経過したら剥がれた細胞のみ回収してください。 - 基材を除き、室温で1,200rpm、3分間遠心分離する。
- 得られた細胞ペレットに、調製した脂肪幹細胞用の増殖培地を加え、ピペッティングして、細胞数をカウントする。
製品データ
hASC・・・・・ヒト脂肪由来幹細胞
hWJ-MSC・・・ヒト臍帯ホウォートンゼリー由来幹細胞
細胞形態・増殖能
幹細胞分離基材を使用して、ヒト脂肪組織をBSCM-SP1 脂肪幹細胞分離培地(1%ヒト血清添加) で培養した際のhASC(ヒト脂肪由来幹細胞)の増殖を確認した。
培養5~6日目から基材の線維に沿ってoutgrowthしているhASCの存在が確認できる。細胞が少ないと見つけるのが難しい。
培養9~10日経過すると、hASC が基材に沿ってoutgrowthしていることがはっきりと確認できる。
培養10~14日経過すると基材全体に増殖する。基材全体の10~20%程度hASCが占めるようになったら基材からASCを回収する。
分化能
6継代後のhASCとhWJ-MSCを脂肪細胞、 骨芽細胞、軟骨細胞に分化誘導して染色し た結果、各細胞に分化した。
(写真はhASCから各細胞に分化誘導して染色した写真)
Oil Red
Alizarin Red
Alcian Blue
●各キットに付属する培地の違い
幹細胞分離基材（5枚）とセルストレーナー（5個）は共通で、培地の種類と量が異なります(※表は横スクロールします）
| 製品名 | 脂肪幹細胞分離キット | 脂肪幹細胞分離キット（アルブミンフリー） | 脂肪幹細胞分離増殖キット（アルブミンフリー） |
|---|---|---|---|
| 付属培地 | 脂肪幹細胞分離培地：100ｍL | BSCM-SP1 脂肪幹細胞分離培地：100ｍL | BSCM-SP1 脂肪幹細胞分離培地：100ｍL BSCM-PL1 間葉系幹細胞増殖培地：200ｍL |
| 抗生剤 | 抗生物質添加済（ペニシリン：100μg/ｍL、ストレプトマイシン：100μg/mL、アムホテリシン：0.25µg/mL） | ||
| 血清 | FBS１％添加済（USDA認証） | なし （ご自身でご用意した血清を２～5％添加してください） |
なし （ご自身でご用意した血清を２～5％添加してください） |
| 色 | フェノールレッド | 無し(若干黄色味がかっています） | 無し(若干黄色味がかっています） |
| 安全性 | 血清配合 | アニマルフリー、アルブミンフリー | アニマルフリー、アルブミンフリー |
| おすすめ |
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| 全キット共通のおすすめ |
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製品内容
キットに含まれる培地は、FBS(1%)が添加されている培地(BMK-R001)とご自身で用意した血清を添加して使用するアルブミンフリー(アニマルフリー)培地(BMK-R004)の2種類から選択できます。
| 製品名 | 脂肪幹細胞分離キット | 脂肪幹細胞分離キット （アルブミンフリー） |
脂肪幹細胞分離増殖キット （アルブミンフリー） |
|---|---|---|---|
| 製品番号 | BMK-R001 | BMK-R004 | BMK-S100 |
| 内容物 | 脂肪幹細胞分離培地：100ｍL 幹細胞分離基材：5枚 セルストレーナー：5個 |
BSCM-SP1 脂肪幹細胞分離培地 （アルブミンフリー）：100mL 幹細胞分離基材：5枚 セルストレーナー：5個 |
BSCM-SP1 脂肪幹細胞分離培地 （アルブミンフリー）：100mL BSCM-PL1 間葉系幹細胞増殖培地：200ｍL 幹細胞分離基材：5枚 セルストレーナー：5個 |
| 保存 | 冷蔵 | 冷蔵 | 冷蔵 |
| 希望販売価格 | お問い合わせください | お問い合わせください | お問い合わせください |
フナコシ㈱またはお問い合わせフォームからご購入いただけます。
製品使用文献
SOCS7-Derived BC-Box Motif Peptide Mediated Cholinergic Differentiation of Human Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells
Int J Mol Sci. 2023 Feb; 24(3): 2786.
Published online 2023 Feb 1. doi: 10.3390/ijms24032786
PubMed
Surgical implantation of human adipose derived stem cells attenuates experimentally induced hepatic fibrosis in rats
Mol Med. 2022; 28: 143.
Published online 2022 Nov 29. doi: 10.1186/s10020-022-00566-6
PubMed
Hepatic phosphatidylcholine catabolism driven by PNPLA7 and PNPLA8 supplies endogenous choline to replenish the methionine cycle with methyl groups
Cell Reports, Volume 42, ISSUE 2, 111940, February 28, 2023111940
Published:January 30, 2023.
Cell Reports
